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實驗室新手指南之PCR儀
發布日期:2017-12-20 瀏覽次數:1770
操作步驟
- 開機:打開開關,視窗上顯示“SELF TEST”,顯示 10 秒中后,顯示 RUN-ENTER 菜單:準備執行程序。
- 放入樣本管,關緊蓋子。
程序輸入與選擇
- 如果要運行已經編好的程序,則直接按《Proceed》,用箭頭鍵選擇已儲存的程序,按《Proceed》,則屏幕顯示:按《Proceed》選擇 ENABLE,則開始執行程序。
- 輸入新的程序:在 RUN-ENTER 菜單上用箭頭鍵選擇 ENTER PROGRAM,按《Proceed》選擇 NEW,命名新的程序,zui多 8 個字母,輸入后按《Proceed》確認(如何輸入字母、數字);輸入程序步驟:名字輸入后,顯示,按《Proceed》則可以輸入溫度(0~100℃),按《Proceed》確認后,則可以輸入孵育時間,用《Select》鍵移動光標,輸入數字,完成后按《Proceed》確認,跳到下一步,輸入方式同上;選擇 GOTO,輸入循環步驟時鏈接到第幾步(循環數zui多可達 9999次)(為實際循環數-1)。選擇 option,顯示:再選擇 increment,按《Proceed》確認,輸入初始的溫度,確認后輸入時間,按《Proceed》確認,然后輸入每個循環增加或減少的溫度,增加用正值,減少用負值(-0.1℃~6℃),按《Proceed》確認。選擇 extend,按《Proceed》確認,輸入每個循環增加或減少的時間(-60~60 秒),按《Proceed》確認;選擇 slop(指溫度上升或下降的速率),輸入溫度的改變值(-0.1~1.5℃)按《Proceed》確認,然后輸入加熱或致冷的速度,按《Proceed》確認;選擇 End,輸入結束步驟。
- 輸入完成的程序后,到 RUN-ENTER 菜單,選擇新程序,開始運行。
- 其它:用《pause》可以暫停一個運行的程序,再按一次繼續程序;用《stop》或《Cancel》可停止運行的程序。
- 編輯程序:可以用《Cancel》鍵刪除輸錯的值,輸入新的值后按《Proceed》確認。對于未輸完的程序,要先輸入 END,按《Proceed》將程序儲存后才能刪除。刪除已經儲存的程序:從 RUN-ENTER 菜單中選擇 RUN-PROGRAM,按《Proceed》,顯示主菜單,選擇 DELET,用《Select》選擇刪除。查看程序的步驟:在主菜單上選擇 LIST,按《Proceed》,用《Select》將選擇名稱,再按《Proceed》,顯示程序的*步,用《Select》鍵向前、向后翻頁查看,此時不能改變程序的值。
- 編輯已有的程序:從 RUN-ENTER 菜 單 中 選 擇 RUN-PROGRAM , 按《Proceed》,顯示主菜單,選擇 EDIT,按《Proceed》確認,用《Select》鍵選擇要編輯的程序,按《Proceed》顯示程序的*步。用《Select》鍵將光標移到要改變的溫度或循環的值上,鍵入新值,按《Proceed》確認,按《Cancel》刪除鍵入的值,出現空格,鍵入新值后確認。注:一旦值被改變或刪除,原來的值不能恢復,必須重新鍵入。編輯時間值:必須重新鍵入小時、分鐘、秒,按《Proceed》。
PCR 體系設置
- 預變性:可用 94~95℃,2~10min,一般用 5min。
- 變性:一般用 94℃,30s~2min,一般 45s~1min。
- 退火:溫度自定,30s~2min。
- 延伸:70~75℃,一般 72℃,對于<2kb,<1min;>2kb,每增加1kb 加 1min。
- 循環數:一般 25~35 個循環。
- zui終延伸:72℃,5~15min。
- 保存:10℃,時間設為 0。
- END。
PCR 儀使用中的一些小技巧
- 仔細閱讀儀器使用說明書,這樣可以充分發揮儀器的性能并避免發生錯誤。
- 程序設計完成后,一定要仔細檢查,以免出錯造成損失。
- 常用的程序調用以前使用過的正確程序文件;樣品量較小時,在樣品槽的兩邊各加上兩排 8 聯管,這樣可使熱蓋平整,加熱效果好,有利于效果的穩定性。
- 在進行各種試劑加樣時,相同的試劑要一起加后再分裝,要用同一只吸液器及同一個槍頭。
- 加樣完成后,用酶聯板離心轉頭將管離心一下,使反應液到管底,因為反應液在管壁或管蓋上時,會嚴重影響實驗結果。
PCR 儀的清洗
- 樣品池的清洗:先打開蓋子,然后用 95%乙醇或 10%清洗液浸泡樣品池 5min,然后清洗被污染的孔;用微量移液器吸取液體,用棉簽吸干剩余液體;打開 PCR 儀,設定保持溫度為 50℃ 的 PCR 程序并使之運行,讓殘余液體揮發去除。一般 5~10min 即可。
- 熱蓋的清洗:對于熒光定量 PCR 儀,當有熒光污染出現,而且這一污染并非來自樣品池時,或當有污染或殘跡物影響到熱蓋的松緊時,需要用壓縮空氣或純水清洗墊蓋底面,確保樣品池的孔干凈,無污物阻擋光路。
- 儀器外表面的清洗:清洗儀器的外表面可以除去灰塵和油脂,但達不到消毒的效果。選擇沒有腐蝕性的清洗劑對 PCR 儀的外表面進行清洗。
- 更換保險絲:先將 PCR 儀關機,拔去插頭,打開電源插口旁邊的保險盒,換上備用的保險絲,觀察是否恢復正常。
PCR 儀的維護
- PCR 儀器需要定期檢測,視制冷方式而定一般半年至少一次。
- PCR 反應的要求溫度與實際分布的反應溫度是不一致的,當檢測發現各孔平均溫度差偏離設置溫度大于 1~2℃時,可以運用溫度修正法糾正 PCR 實際反應溫度差。
- PCR 反應過程的關鍵是升、降溫過程的時間控制,要求越短越好,當 PCR 儀的降溫過程超過 60s,就應該檢查儀器的制冷系統,對風冷制冷的 PCR 儀要較*地清理反應底座的灰塵;對其他制冷系統應檢查相關的制冷部件。
- 一般情況如能采用溫度修正法糾正儀器的溫度時,不要輕易打開或調整儀器的電子控制部件,必要時要請專業人員修理或利用儀器電子線路詳細圖紙進行維修。??
魏經理
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